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1型鸭甲型肝炎病毒对不同年龄鸭致病性及其免疫应答
苏杰
北京博亚和讯农牧技术有限公司
鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)是由鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)引起的一种高致病性和高感染性的雏鸭疾病,主要表现为肝坏死和出血[1]。
材料与方法
7日龄和160日龄鸭分别感染DHAV-1 强毒株CH株和免疫商品化疫苗CH60株,分别于12h、 24h、36h、2d、3d、5d和7d采集肝脏,4%的多聚甲醛固定,用于组织病理学检查;另称取0.05g组织抽提RNA。一步法双重qRT-PCR测定肝脏中病毒拷贝数[3]。使用PrimeScript™ RT reagent Kit 将总RNA反转录成cDNA。使用SYBR®Premix Ex Taq™ II Kit检测肝脏中细胞因子(TLR3、TLR7、 RIG-I、MDA5、NLRP3、MHC-I、MHC-Ⅱ、IFN-α、IFNβ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、Mx1、OASL和PKR)mRNA转录水平的表达。
结果与讨论
在雏鸭肝脏中,CH株(1010.88copies/ g)相较于CH60株(108.78 copies/g)具有更高的病毒滴度,并导致肝脏明显的瘀斑出血,病理切片可见大量红细胞。雏鸭感染DHAV-1后表现出强烈的免疫反应,主要是诱导模式识别受体以及干扰素和白介素的表达。结果显示,雏鸭在感染CH株的早期(12-24hpi),肝脏中TLR-7相较于RIG-1和MDA5的表达上调高得多,在感染中期(36h-3d)会有所降低,而感染后期(5d-7d)TLR7的表达逐渐增加,在成年鸭的肝脏中也得到相似的结果,这表明TLR7信号通路可能是机体抵抗DHAV-1感染的主要途径。在感染后36h,CH株诱导雏鸭肝脏表达了大量的IFNα和IFNβ,抗病毒蛋白MX和PKR也开始明显上调,但在前期(12-24hpi)表达量较少。同时CH株诱导了IL-1β, IL-2, IL-4,IL-6, IL-10的大量表达,诱发细胞因子风暴。在成年鸭肝脏中,定量检测可见CH株(108.18copies/ g)和CH60株(107.47copies/g)